牛肉蛋白质提取分离(动物组织中dna的提取为什么要新鲜牛肉)-菲力牛肉网

牛肉蛋白质提取分离(动物组织中dna的提取为什么要新鲜牛肉)

大家好，关于牛肉蛋白质提取分离很多朋友都还不太明白，今天小编就来为大家分享关于动物组织中dna的提取为什么要新鲜牛肉的知识，希望对各位有所帮助！

水解牛肉蛋白的好处

水解牛肉蛋白具有特殊优势，因为它不太可能因水解过程而引起额外的食物反应，水解过程会将蛋白质分解成小块。肾上腺恢复和肠道平衡方案中使用水解牛肉蛋白来增强身体。

既然谈到了牛肉，下面我们来了解一下相关知识。

挑选牛肉之“看、摸、闻”：

1、观察颜色。正常新鲜的牛肉肌肉呈暗红色，均匀、有光泽、外表微干，尤其在冬季其表面容易形成一层薄薄的风干膜，脂肪呈白色或奶油色。而不新鲜的牛肉的肌肉颜色发暗，无光泽，脂肪呈现黄绿色；

2、摸手感。新鲜的牛肉富有弹性，指压后凹陷可立即恢复，新切面肌纤维细密。不新鲜的牛肉指压后凹陷不能恢复，留有明显压痕；

3、闻气味。新鲜肉具有鲜肉味儿。不新鲜的牛肉有异味甚至臭味。如今食品安全令人担忧，各种造假无处不在，牛肉也没能幸免。

在这里简单向大家介绍牛肉的真假识别方法：

1、如何识别新鲜牛肉？新鲜牛肉质地坚实有弹性，肉色呈鲜红色，肌纤维较细。嫩牛肉脂肪呈白色，反之肉色深红，触摸肉皮粗糙者多为老牛肉，不要购买。

2、如何识别注水牛肉？牛肉注水后，肉纤维更显粗糙，暴露纤维明显；因为注水，使牛肉有鲜嫩感，但仔细观察肉面，常有水分渗出；用手摸肉，不粘手，湿感重；用干纸巾在牛肉表面，纸很快即被湿透。而正常牛肉手摸不粘手，纸贴不透湿。

动物组织中dna的提取为什么要新鲜牛肉

真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA.真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。

蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA分离，EDTA则抑制细胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。

二、仪器及试剂

1.仪器：

恒温水浴锅、台式离心机、紫外分光光度计（GeneQuant）、移液器、玻璃匀浆器、离心管（灭菌）、吸头（灭菌）

2.试剂：

（1）细胞裂解缓冲液：

Tris（pH8.0）100mmol/L

EDTA（pH8.0）500mmol/L

NaCL20mmol/L

SDS10%

胰RNA酶20ug/ml

（2）蛋白酶K：称取20mg蛋白酶k溶于1ml灭菌的双蒸水中，-20℃备用。

（3）TE缓冲液（pH8.0）：高压灭菌，室温贮存。

（4）酚，氯仿，异戊醇（25:24:1）。

（5）异丙醇、冷无水乙醇、70%乙醇、灭菌水。

三、操作步骤

1.取新鲜或冰冻动物组织块0.1g（0.5cm3），尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，转入1.5ml离心管中，加入蛋白酶K（500ug/ml）20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12-24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000rpm离心5min，取上清液入另一离心管中。

2.加2倍体积异丙醇，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100μl吸头挑出，凉干，用200μlTE重新溶解。（可进行PCR反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行。）

3.加等量的酚，氯仿，异戊醇（25:24:1）、振荡混匀，离心12000rpm，5min。

4.取上层溶液至另一管，加入等体积的氯仿，异戊醇（24：1），振荡混匀，离心12000rpm，5min。

5.取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/L乙酸氨加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温沉淀2min，离心12000rpm，10min。

6.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。

7.用1ml70%乙醇洗涤沉淀物1次，离心12000rpm，5min。

8.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。

9.加200ulTE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或-20℃保存备用。

10.吸取适量样品于GeneQuant上检测浓度和纯度。

牛肉中的蛋白质在多高的水温中分解出氨基酸