牛肉膏蛋白胨培养基的配置实验?牛肉膏蛋白胨培养基的配制
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牛肉膏蛋白胨培养基配方是什么
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:牛肉膏3g。蛋白胨10g。NaCl5g。琼脂15—20g。水1000ml。pH7.4—7.6。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基是一种应用十分广泛的天然培养基,其中的牛肉膏为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素,蛋白胨主要提供氮源和维生素,NaCl提供无机盐。步骤称量,按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏蛋白胨培养基步骤
称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。
溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。
调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7.6。反之,则用1mol/LHCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。
以上内容参考:百度百科——牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
牛肉膏蛋白胨培养基的配制
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:
牛肉膏3g
蛋白胨10g
NaCl5g
琼脂15—20g
水1000ml
pH7.4—7.6
三、器材
牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂;
1mol/LNaOH,1mol/LHCl;
试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸(pH5.5—9.0),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。
四、操作步骤
1.称量
按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。
2.溶化
在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
3.调pH
在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7.6。反之,则用1mol/LHCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。
对于有些要求pH值较精确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行(使用方法,可参考有关说明书)。
4.过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去(本实验无需过滤)。
5.分装
按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图Ⅴ-2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
6.加塞
培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。
7.包扎
加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
8.灭菌
将上述培养基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃,20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
9.搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
10.无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否彻底。
附:棉塞的制作
棉塞的作用有二:一是防止杂菌污染;二是保证通气良好。因此,棉塞质量的优劣对实验的结果有很大的影响。正确的棉塞要求形状、大小、松紧与试管口(或三角烧瓶口)完全适合,过紧则防碍空气流通,操作不便;过松则达不到滤菌的目的。加塞时,应使棉塞长度的1/3在试管口外,2/3在试管口内,如图Ⅴ-3。棉塞的制作过程如图Ⅴ-4。
此外,在微生物实验和科研中,常要用通气塞。所谓通气塞,就是几层纱布(一般为8层)相互重叠而成,或是在两层纱布间均匀铺一层棉花而成。这种通气塞通常加在装有液体培养基的三角烧瓶口上。经接种后,放在摇床上进行振荡培养,以获得良好通气促使菌体的生长或发酵。通气塞的形状
配制牛肉膏蛋白胨培养基有哪些操作步骤
牛肉膏蛋白胨培养是微生物培养最基础的常见培养基,细分有如下四步骤:
1.
配方成分的确认,选取。确认培养基成分以及各组分的量,打开电子天平,从药品柜取出后按照顺序摆放好。
2.
选取工具的选择,称量。待电子天平稳定后,称量蛋白胨,牛肉膏,琼脂条等,放到白瓷缸中。
3.
煮培养基,灭菌。把配置好的培养基在电炉上加热,要注意不停搅拌,很容易爆沸溢出。打开灭菌锅,待煮好培养基分装后,灭菌锅温度差不多,开始放入,设定好温度和时间,灭菌。
4.
灭完菌后,趁热倒平板,或者摆斜面。
至此,牛肉膏蛋白胨培养基就做好了。
关于牛肉膏蛋白胨培养基的配置实验的内容到此结束,希望对大家有所帮助。
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